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【仪器信息网 行业应用】本实验成功建立了基于气相色谱-质谱联用技术(GC-MS) 的尿中有机酸高灵敏度检测方法,依托东西分析GC-MS 3250型气质联用仪的高性能四极杆质量分析器,实现了对复杂生物样本中痕量代谢标志物的精准定性与定量分析。其出色的线性关系(R²>0.997)与多代谢通路覆盖性,使其在临床诊断、代谢组学研究及新生儿筛查等领域具备重要应用潜力,可供相关人员参考。
PART ONE实验部分
仪器设备
GC-MS3250型气质联用仪
有机酸标样,分析天平、涡旋混合器、离心机、氮吹仪、烘箱、冰箱
移液枪、精密PH试纸、容量瓶、具塞玻璃试管等。
仪器条件
色谱条件:
Equity-5(30m×0.25mm×0.25μm)石英毛细管柱,柱流量:1mL/min,分流进样,分流比:40:1,进样量:1uL,进样口:260℃,柱温:80℃保持1min,然后以5℃/min升至270℃,保持2min。
质谱条件:
EI源,电子能量:70eV,离子源:200℃,接口:270℃,扫描方式:全扫描定性,扫描范围:50u500u,溶剂峰时间:5min,电子倍增器高压:700 V。
样品前处理
取约20mL尿样于50mL塑料离心试管中,置于离心机中离心约5min,移取2ml澄清尿样于10mL的玻璃具塞试管中,加入50uL 4000mg/L的十七烷酸内标物, 加入1mL 5%盐酸羟胺水溶液,涡旋混匀,室温下进行肟化反应60min;肟化反应完成后加入一定量的盐酸调节PH值为1,加入约1g氯化钠涡旋使水层饱和,加入3mL乙酸乙酯涡旋提取,提取两次,静置分层后将提取液合并于同一玻璃具塞试管中(共准确移取出5mL提取液),然后于氮吹仪中50℃慢慢吹干,吹干后加入200uL衍生化试剂(BSTFA+TMCS 99:1),涡旋混合,然后放置于烘箱中于80℃衍生化反应30min,反应完成后将其转移至2mL小样品瓶中,然后取1uL进GC-MS分析。
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