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【仪器设备网 行业应用】本文参考2020版《中国药典》2341 通则中的第五法使用LabTech SPE 1000全自动固相萃取系统对常用根茎类药材甘草中的农药进行固相萃取，分别采用GC-MS、LC-MS检测，建立了一套中药农残的处理检测方法，其中GC-MS组分别采用GCB/NH2柱净化与HLB柱净化样品，两种方法的回收率及平行性良好，加标回收率分别为71.1%~101.2%和73.3%~106.7%，重复性RSD分别为1.2%~8.6%和1.3%~9.0%，LC-MS组采用HLB柱净化样品，加标回收率为74.8%~113.4%，重复性RSD为2.3%~9.8%，均满足药典要求，适合2341第五法通则所规定中药农残检测。
1仪器设备及试剂
1.1仪器设备
SPE 1000全自动固相萃取系统(莱伯泰科公司);7890B-5977B气相色谱质谱联用仪(安捷伦公司);SCIEX Exion LC™液相系统+ Triple Quad™ 4500质谱系统(SCIEX中国公司);MultiVap-10全自动高通量平行浓缩仪(莱伯泰科公司);EV400VAC旋转蒸发仪(莱伯泰科公司)。
1.2 试剂及耗材
乙腈(色谱级);甲苯(农残级);乙腈-甲苯混合溶液(3∶1)，现用现配;氯化钠(分析纯);蒸馏水;HLB固相萃取住(200mg，6mL，莱伯泰科);GCB/NH2固相萃取柱(500mg/500mg，6mL，莱伯泰科)33种农残混标工作液：5μg/L，溶剂为乙腈，购自坛墨质检;磷酸三苯酯内标工作液：0.1mg/L，溶剂为乙腈，购自坛墨质检;30种农残混标工作液：5μg/L，溶剂为乙腈，购自坛墨质检。
2实验方法
2.1样品处理
称取甘草粉末(过3号筛)5g，加氯化钠1g，摇散后加入乙腈50mL，匀浆处理2min(每分钟不低于12000转)，离心5min(每分钟4000转)，取上清液，沉淀再加入50mL乙腈匀浆，离心，合并两次上清液，旋蒸浓缩至3~5mL后，用乙腈定容至10mL。
2.2 GCB/NH2柱固相萃取法
将2.1制得的样品各取2mL放入SPE 1000全自动固相萃取系统，按照图1所示的方法进行样品的固相萃取净化步骤。收集洗脱液，旋蒸浓缩，用乙腈转移并定容至2mL。
图1 GCB/NH2柱固相萃取流程
2.3 HLB柱固相萃取法
将2.1样品各取3mL放入SPE1000全自动固相萃取系统，按照图2所示的方法进行样品的固相萃取净化步骤，收集净化液。
图2 HLB柱固相萃取流程
2.4 基质加标回收率实验
基质标准曲线的配制：分别按照2.2、2.3制备空白基质溶液，各取1mL(每种方法所得样品平行6份)至MultiVap-10全自动高通量平行浓缩仪上，40℃浓缩至约0.6mL，分别加入10μL、20μL、50μL、100μL、150μL、200μL混标工作液，加乙腈定容至1mL，混匀。按2.1方法准备样品，进行加标实验，5g样品加标1μg，然后分别按照2.2、2.3方法进行实验，同时进行6个平行样品，用来测定加标回收率及平行性。取处理好的样品溶液(或基质混标溶液)1mL，GC-MS法精密加入内标0.3mL，LC-MS法精密加入水0.3mL，混匀待测。
2.5 GC-MS分析条件
2.5.1 气相色谱条件
色谱柱：Agilent DB-5ms毛细管柱：30 m*250 μm*0.25μm;进样口温度：270℃;柱温程序：初始温度100℃，以5℃/min升至180℃，保持5min，然后以5℃/min升至220℃保持6min，再以10℃/min升至280℃，保持5min。进样量：1 μL;进样方式：不分流进样;流速：1.0mL/min;
2.5.2 质谱条件
离子源温度：280℃;辅助加热温度：290℃;溶剂延迟：3min;扫描方式：全扫描(SCAN)方式用于定性/选择离子扫描模式(SIM)用于定量。
2.5 LC-MS分析条件
2.6.1 液相色谱条件
色谱柱：Shim-pack Velox C18(2.7μm，2.1*100mm);流动相：A: 0.1%甲酸溶液(含5 mmol/L 乙酸铵);B:乙腈-0.1%甲酸溶液(含5 mmol/L乙酸铵)(95:5);流速：0.4 mL/ min;柱温：40℃;进样量：2 μL;洗脱梯度：0~1min，30%B;7min~8min，100%B;8.1~10min，30%B。
2.6.2 质谱条件
离子源：ESI源，正离子模式;离子源参数：IS电压：5500V 气帘气CUR:30 psi;雾化气GS1:55 psi 辅助气GS2:55 psi;源温度TEM:550℃碰撞气CAD:Medium。
3结果和讨论
由表4、5、6可知，2020版《中国药典》2341第五法GC-MS组中GCB/NH2柱固相萃取和HLB柱固相萃取的加标回收率分别为71.1%~101.2%和73.3%~106.7%，重复性RSD分别为1.2%~8.6%和1.3%~9.0%，LC-MS组HLB柱固相萃取的加标回收率为74.8%~113.4%，重复性RSD为2.3%~9.8%，均满足药典要求。综上所述，莱伯泰科SPE1000全自动固相萃取系统、EV400VAC旋转蒸发仪及MultiVap-10全自动高通量平行浓缩仪能够高效、稳定地达到实验的要求，适用于2020版《中国药典》2341第五法中规定的中药农残测定，适用于中药甘草样品的前处理实验。
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